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      細胞基質金屬蛋白酶12活性熒光定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)
      時間:2023/10/10 點擊次數:221

      細胞基質金屬蛋白酶12活性熒光定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)

       

      主要用途

       

       細胞基質金屬蛋白酶12MMP-12)活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過熒光探針5-羧基熒光素供體和QXL受體標記的多肽底物RPKPVENvaWRK,在蛋白酶的水解下,解離抑制基團,產生熒光產物,即采用熒光法來測定樣品中酶活性*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品(動物、人體)、部分或*純化酶樣品中基質金屬蛋白酶12的定量檢測,以及抑制劑和激活劑的篩選。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定,安全可靠。

       

      技術背景

       

      基質金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases;MMPs是一類結構高度同源的分泌型或膜相關性鋅內肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。其功能在于分解細胞外基質成分。迄今為止發現的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細胞外基質(extracellular matrix)成分,同時參與胚胎發育、形態形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissue resorption)、疾病發生,例如關節炎、癌細胞浸入轉移等。根據降解的底物不同可將MMPs分為4大類:(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內絕大多數細胞并不儲備MMPs,當需要MMPs的信號傳遞到細胞后才臨時合成,合成的MMPs以無活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應。基質金屬蛋白酶12MMP12),又稱為巨噬細胞彈力蛋白酶(macrophage elastase),其目標蛋白是彈性蛋白elastin)、纖維連接蛋白fibronectin)、層粘蛋白laminin)、纖維蛋白溶酶原plasminogen)、尿激酶型纖溶酶原激活物受體u-PAR)和組織因子通路抑制劑(tissue factor pathway inhibitor)。MMP12與吸煙型肺氣腫smoke-induced emphysema)、腫瘤和其它疾病等發生有關。MMP12酶原型為54kD,而活化型為45kD22kD。基質金屬蛋白酶12的活性檢測通過熒光共振能量轉移法(Fluorescence resonance energy transfer;FRET),即傳遞激發狀態的能量由處于較短波長的供體(donor到覆蓋供體波長的受體(acceptor),使得距離依賴性反應的供體的散發光子淬滅(quench)?;诙嚯牡孜?/span>RPKPVENvaWRK兩端標記的供體熒光探針5-羧基熒光素5-carboxyfluorescein;5-FAM)受到另一個受體基團QXL的抑制而熒光淬滅(quench)。一旦多肽受到MMP12水解,釋放出具有強烈熒光的5-羧基熒光素多肽片段,據此根據其熒光強度(激發波長490nm,散發波長520nm)的變化,來定量測定基質金屬蛋白酶12的活性。基質金屬蛋白酶12反應系統為:

      MMP12

      5-FAM-RPKPVE-Nva-WRK-QXL-NH2   →    5-FAM-RPKP  +  VE-Nva-WRK-QXL-NH2 

       



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